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課程名稱 |
細胞生物學實驗
CELL BIOLOGY LAB. |
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開課學期 |
97-1 |
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授課對象 |
生命科學院 生命科學系 |
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授課教師 |
陳俊宏 |
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課號 |
LS2002 |
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課程識別碼 |
B01 21130 |
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班次 |
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學分 |
2 |
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全/半年 |
半年 |
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必/選修 |
必修 |
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上課時間 |
星期三5,6,7,8,9,A(12:20~19:15) |
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上課地點 |
生科134 |
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備註 |
Ｆ群選擇必修。需先修過細胞生物學正課。與李心予、黃偉邦、潘建源合開
限本系所學生(含輔系、雙修生) 且 限學士班三年級以上
總人數上限：20人 |
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Ceiba 課程網頁 |
http://ceiba.ntu.edu.tw/971celllab |
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課程簡介影片 |
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核心能力關聯 |
核心能力與課程規劃關聯圖 |
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課程大綱
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為確保您我的權利,請尊重智慧財產權及不得非法影印
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課程概述 |
以三~四人為一組進行各項實驗操作。本系列實驗將以PC-3人類前列腺細胞株做為材料，進行細胞培養的操作，一般每2∼3天需進行一次繼代培養。 課程目標：熟練細胞培養與相關細胞學之實驗技術課程內容：指導學生親自操作細胞生物學相關實驗技術，包括以下主題：1. Animal cell culture: sterilization, media preparation, subculture, and inverted phase microscopy2. Cell staining: Giemsa staining, cell viability assay, immunocytochemistry, and fluorescent microscopy3. Cell population assay: hemocytometer, BCA assay, and propidium iodide assay4. Biotinylation: SDS-PAGE and Western blotting5. Cell and organelle isolation: Percoll gradient centrifugation and dot blotting6. Electronic microscopy7. mtDNA and mRNA purification8. PCR9. Enzyme activity assay: protein kinase, lactase, etc.10. Yeast two-hybrid:11. Flowcytometry or transfection12. Intracellular pH and intracellular calcium assay13. Image analysis on cell biology:14. Student’s data presentation:
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課程目標 |
透過實際操作，訓練學生操作細胞從事細胞階層的生物學實驗 |
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課程要求 |
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預期每週課後學習時數 |
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Office Hours |
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指定閱讀 |
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參考書目 |
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評量方式
(僅供參考) |
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No. |
項目 |
百分比 |
說明 |
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1. |
課前測驗與流程 |
10% |
每次上課前，針對當次實驗內容，都有一簡單測驗，並檢查各人實驗流程簡圖。 |
2. |
實驗報告 |
40% |
每單元操作完後，除另有宣布外，應於次週上課前將實驗結果寫成報告交至助教處，並將實驗流程附於最後。 |
3. |
期中考 |
15% |
包含筆試及實做。 |
4. |
期末考 |
25% |
包含筆試及實做。 |
5. |
其他 |
10% |
如值週工作是否確實執行，實驗習慣是否良好等等。 |
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週次 |
日期 |
單元主題 |
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第1週 |
9/17 |
簡介 |
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第2週 |
9/24 |
顯微鏡原理與操作 |
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第3週 |
10/01 |
無菌操作原理與練習 |
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第4週 |
10/08 |
繼代培養(細胞的照片以按組別壓縮好了，同學請自行下載) |
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第5週 |
10/15 |
繼代培養(細胞計數)(2%及10%FBS Medium 中細胞之生長情形結果，各組同學請參考第七組的結果) |
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第6週 |
10/22 |
細胞冷凍保存：本實驗需分多天多次操作，請確實安排時間。上課PowerPoint分黑白（BW）與彩色（color），請自行下載，各約3 MB。 |
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第7週 |
10/29 |
簡易胞器分離 |
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第8週 |
11/05 |
蛋白質電泳 |
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第9週 |
11/12 |
期中考 |
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第10週 |
11/19 |
細胞週期 |
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第11週 |
11/26 |
估算細胞族群及存活率(報告除了老師出的作業外，實驗部分請寫1.實驗目的 2.實驗藥品 3.實驗步驟4.結果(討論實驗一的數據，實驗一二三的照片)，以及5.誤差討論。) |
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第12週 |
12/03 |
細胞酵素活性測定 (12/17交報告，報告要寫目的、原理、結果、討論） |
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第13週 |
12/10 |
影像分析: ImageJ.ppt是上課講義，請先下載安裝ImageJ程式（Webpage list in p27）。01~11.tif是同一隻細胞不同Z軸切面；Dimeric.jpg是定量練習；Protein Marker.jpg是protien gel練習；PC083733.jpg是數細胞練習。 |
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第14週 |
12/17 |
細胞分化與骨架顯影 (40.JPG是在40x下的血球計數器)(本週與下週的上課講義皆在此PPT檔中) |
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第15週 |
12/24 |
胞器顯影（本週上課包括胞器顯影與鈣離子測量
壓縮檔內有兩種不同處理方式的細胞 (control和NGF處理)
一種處理方式有21張不同Z軸座標的切面
各位請利用ImageJ把每張圖做RGB color split
然後利用3D stacking疊成3D影像
每張切面圖含有phalloidin ( Red), DAPI ( Blue)和明視野( Green)
所以最後必須每種處理方式的細胞有四種疊圖
包括只有phalloidin, 只有DAPI, 指有明視野和RGB merge的疊圖
結果隨同結報交上,請勿遲交 |
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第16週 |
12/31 |
胞內鈣離子濃度測量與共軛交顯微鏡參觀（將分兩大組，一組先參觀，另一組先進行實驗，1.5 hr交換）LU9.RAR is 4MB (be patient) |
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第17週 |
1/07 |
期末考 |
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